Título: AVALIAÇÃO DO POTENCIAL ENZIMÁTICO DE DIFERENTES CEPAS DE Bacillus subtilis GRUPO

Título alternativo: EVALUATION OF ENZYMATIC POTENTIAL OF DIFFERENT STRAINS OF Bacillus subtilis GROUP

Autoria de: Clariane Arruda Goncalves

Orientação de: Cristina Ferreira Silva e Batista

Coorientação de: Clara Rezende de Souza Castro

Presidente da banca: Cristina Ferreira Silva e Batista

Primeiro membro da banca: Luciana Silva Ribeiro Martins

Segundo membro da banca: Clara Resende de Souza Castro

Terceiro membro da banca: Tainá de Sousa Cearense Torres

Palavras-chaves: Bacillus subtilis, Celulase, Manganês peroxidase, Produção enzimática, Enzimas lignocelulíticas.

Data da defesa: 15/09/2022

Semestre letivo da defesa: 2022-1

Data da versão final: 19/09/2022

Data da publicação: 19/09/2022

Referência: Goncalves, C. A. AVALIAÇÃO DO POTENCIAL ENZIMÁTICO DE DIFERENTES CEPAS DE Bacillus subtilis GRUPO. 2022. 52 p. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Ciências Biológicas Bacharelado)-Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2022.

Resumo: Enzimas microbianas são atualmente utilizadas em larga escala e as bactérias são preferencialmente utilizadas devido ao seu menor tempo de replicação e facilidade de manipulação genética. Uma das principais espécies utilizadas mundialmente na produção enzimática é Bacillus subtilis, que tem se destacado em diversas áreas. Diante disso, este trabalho teve como objetivo selecionar diferentes cepas de Bacillus subtillis para produção de enzimas de interesse industrial, tais como celulase, xilanase, amilase, lacase e manganês peroxidase. Foram utilizadas 10 cepas de Bacillus subtilis (CCMA 0081, 0051, 0054, 0087, 0136, 0401, 0658, 1228, 1287 e 1340) pertencentes à Coleção de Cultura de Microbiologia Agrícola (CCMA). Os inóculos foram padronizados de acordo com a escala de McFarland e o cultivo foi realizado pelo método de microgota, em meio Ágar Nutriente, acrescido dos seguintes marcadores enzimáticos (0,1) guaiacol (lacase), xilana (xilanase), carboximetilcelulose (celulase) e amido (amilase) e dois tratamentos foram utilizados com e sem adição de glicose (0,1) ao meio. Este teste semiquantitativo demonstrou CCMA 0658 obteve os melhores resultados para índices enzimáticos. A fermentação submersa foi realizada para essa cepa, à 35?C por 24h em erlenmeyers com 10 ml de inóculo e 90ml de caldo nutriente, acrescido dos respectivos indutores (0,1) com e sem glicose (0,1) e foram mantidos sob agitação à 120 rpm. para obtenção dos extratos brutos enzimáticos, nos intervalos de tempo T0 (0 h), T1 (12 h), T2 (36 h), T3 (60 h), T4 (84 h), foram retiradas alíquotas de 1 mL referentes a cada amostra, centrifugadas a 10.000 rpm por 5 minutos. O sobrenadante foi retirado para determinação das atividades enzimáticas em espectrofotômetro com leitor de microplacas ELISA. As reações para leitura, seguiram metodologia específica para cada enzima. Os experimentos foram realizados em triplicata. Todas as enzimas apresentaram atividade, se destacando, no entanto, celulase e manganês peroxidase. Celulase apresentou seu pico de atividade no fator sem glicose as 36h com 0,4271 UL e com glicose as 12h com 0,2583 UL Já manganês peroxidase sem glicose a atividade máxima ocorreu às 84 h com 19,35 UL. No fator com glicose o único tempo que apresentou atividade enzimática foi as 36h com 4,44 UL. Possivelmente valores baixos das demais enzimas traduzem-se uma baixa concentração dos indutores utilizados. Dessa forma entende-se que seja necessário realizar tais análises com concentrações maiores como por exemplo a 1.

Abstract: Microbial enzymes are currently used on a large scale and as bacteria they are preferentially used due to their shorter replication time and ease of genetic manipulation. One of the main ones used worldwide in enzymatic production is Bacillus subtilis, which has stood out in several areas. Therefore, this work aimed to select different strains of Bacillus for the production of enzymes of industrial interest, such as cellulase, xylanase, amylase, laccase and manganese peroxidase. Ten strains of Bacillus subtilis (CCMA 0081, 0051, 0054, 0087, 0136, 0401, 0658, 1228, 1287 and 1340) belonging to the Agricultural Microbiology Culture Collection (CCMA) were used. Inoculums were changed according to the McFarland scale and the enzyme marker nutrition method (0.1). ) and amidoam (ilase) and two treatments were used with and without addition of glucose (0.1) to the medium. This semi-quantitative CC 065 enzymatic test obtained the best results indices for results. Submerged fermentation was carried out for this strain at 35?C for 24h in erlenmeyers with 10 ml of inoculum and 90 ml of nutrient broth, plus the respective inducers (0.1) with and without glucose (0.1) and were solution at 120 rpm to remove the crude enzymatic extracts, at time intervals T0 (0 h), T1 (12 h), T2 (36 h), T3 (60 h T4 (84 h), aliquots of 1 mL references were taken centrifuged at 10,000 rpm for 5 minutes for each sample. The supernatant was removed for determination of enzymatic activities in a spectrophotometer with an ELISA microplate reader. As reactions for reading, they followed specific methodology for each enzyme. The experiments were performed in triplicate. All enzymes show activity, however, cellulase and manganese peroxidase stand out. glucose, the only time that showed enzymatic activity was at 36h with 4.44 UL. Possibly low values of the other enzymes translate into a low concentration of the used inducers. Thus, it is understood that it is necessary to carry out such examples with 1, which can be important.

URI: sip.prg.ufla.br/publico/trabalhos_conclusao_curso/acessar_tcc_por_curso/
ciencias_biologicas_bacharelado/20221201711844

URI alternaviva: sem URI do Repositório Institucional da UFLA até o momento.

Curso: G012 - CIÊNCIAS BIOLÓGICAS (BACHARELADO)

Nome da editora: Universidade Federal de Lavras

Sigla da editora: UFLA

País da editora: Brasil

Gênero textual: Trabalho de Conclusão de Curso

Nome da língua do conteúdo: Português

Código da língua do conteúdo: por

Licença de acesso: Acesso aberto

Nome da licença: Licença do Repositório Institucional da Universidade Federal de Lavras

URI da licença: repositorio.ufla.br

Termos da licença: Acesso aos termos da licença em repositorio.ufla.br

Detentores dos direitos autorais: Clariane Arruda Goncalves e Universidade Federal de Lavras

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