Título: Avaliação dos métodos de Moinho de bolas e Choque Osmótico para ruptura celular da Sacharomyces cerevisiae

Título alternativo: Evaluation of ball mill and osmotic shock methods for cell rupture of Sacharomyces cerevisiae

Autoria de: Bianca Natalia Alves

Orientação de: Luciano Jacob Correa

Presidente da banca: Luciano Jacob Côrrea

Primeiro membro da banca: Gilson Campani Júnior

Segundo membro da banca: João Moreira Neto

Palavras-chaves: Enzima, Ruptura Celular, Moinho de Bolas, Choque Osmótico, atividade enzimática.

Data da defesa: 21/08/2020

Semestre letivo da defesa: 2020-1

Data da versão final: 04/09/2020

Data da publicação: 04/09/2020

Referência: Alves, B. N. Avaliação dos métodos de Moinho de bolas e Choque Osmótico para ruptura celular da Sacharomyces cerevisiae. 2020. 55 p. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Engenharia Química Bacharelado)-Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2020.

Resumo: Algumas biomoléculas são acumuladas intracelularmente em células de microrganismos. O processo de ruptura celular constitui o fator chave na produção e purificação de enzimas intracelulares. Neste estudo, foi realizado o rompimento da parede celular da Sacharomyces cerevisiae (fermento biológico) através dos Métodos do Moinho de Bolas e Choque Osmótico para extração da enzima invertase. Para ambos os métodos foram variados os tempos de extração (1 5 e 10 min). Além disso para o Método do Moinho de Bolas foi variada a quantidade de esferas (1 3 e 5 g) e para o Método do Choque Osmótico a concentração de bicarbonato (0,1 0,5 e 1 M). Para a obtenção do extrato enzimático, ao final do rompimento foi realizada a purificação do produto através de Centrifugação. Posteriormente foi promovida uma reação entre o extrato enzimático e uma solução de sacarose, e feita a leitura espectrofotométrica da glicose formada. Através da Curva Padrão da glicose foi possível calcular a velocidade de reação e a atividade enzimática. Analisando os valores obtidos para atividade, foi percebido que em ambos os métodos, houve crescimento da mesma com o aumento do tempo. Os resultados também apontaram que para o Moinho de Bolas, a atividade cresceu com o aumento da quantidade de esferas. Nesse caso, a opção mais viável dentre as condições avaliadas, é a combinação que incluí a maior quantidade de esferas de vidro (5 g) e o menor tempo (1 minuto). Já para o Choque Osmótico, a atividade diminuiu com o aumento da concentração de bicarbonato, indicando inibição da reação. A opção mais viável foi a concentração de 0,1 M de bicarbonato combinada com o maior tempo (10 minutos) onde os resultados foram expressivamente melhores. Para análise da opção mais viável não foi levado em conta apenas os valores obtidos, mas também os esforços empreendidos para alcança-los. Em comparação aos dois métodos estudados, foi concluído que o Moinho de bolas é o mais eficiente, sendo que as atividades por ele obtidas variam entre 56 e 77 UmL aproximadamente, enquanto que para o método do Choque Osmótico, os valores de atividade variam entre 11 e 51 UmL aproximadamente.

Abstract: Some biomolecules are accumulated intracellularly in cells of microorganisms. The cell disruption process is the key factor in the production and purification of intracellular enzymes. In this study, the rupture of the cell wall of Sacharomyces cerevisiae (biological yeast) was carried out through the Ball Milling and Osmotic Shock Methods for the extraction of the invertase enzyme. For both methods, the extraction times were varied (1 5 and 10 minutes). Moreover, for the Ball Milling Method the quantity of spheres was varied (1 3 and 5 g), and for the Osmotic Shock Method the concentration of bicabornate (0.1 0.5 and 1 M). By the end of the disruption, to obtain the enzymatic extract, the product was purified by centrifugation. Subsequently, a reaction between the enzyme extract and a sucrose solution was carried out, and the spectrophotometric reading of the formed glucose was made. With the Standard Glucose Curve, it was possible to calculate the reaction rate and the enzyme activity. Analyzing the values obtained for the activity, it was noticed that in both methods, there was an increase in activity as time went by. The results also showed that for the Ball Milling, the activity grew with the increase in the quantity of spheres. In this case, the most viable option among the conditions evaluated, is the combination that includes the largest amount of glass spheres (5 g) and the shortest time (1 minute). As for the Osmotic Shock, the activity decreased with the increase of the bicabornate concentration, indicating inhibition of the reaction. The most viable option was the 0.1 M concentration of bicabornate combined with the longest time (10 minutes), where the results were significantly better. For the analysis of the most viable option, not only the values obtained were taken into account, but also the efforts made to achieve it. Comparing the two methods studied, it was concluded that the Ball Milling is the most efficient, since the activities obtained by it vary between 56 and 77 UmL approximately, whereas for the Osmotic Shock Method, the activity values vary between 11 and 51 UmL approximately.

URI: sip.prg.ufla.br/publico/trabalhos_conclusao_curso/acessar_tcc_por_curso/
engenharia_quimica/20201201420785

URI alternaviva: repositorio.ufla.br/handle/1/44833

Curso: G033 - ENGENHARIA QUÍMICA (BACHARELADO)

Nome da editora: Universidade Federal de Lavras

Sigla da editora: UFLA

País da editora: Brasil

Gênero textual: Trabalho de Conclusão de Curso

Nome da língua do conteúdo: Português

Código da língua do conteúdo: por

Licença de acesso: Acesso aberto

Nome da licença: Licença do Repositório Institucional da Universidade Federal de Lavras

URI da licença: repositorio.ufla.br

Termos da licença: Acesso aos termos da licença em repositorio.ufla.br

Detentores dos direitos autorais: Bianca Natalia Alves e Universidade Federal de Lavras

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